Тест-система для определения биоактивности интерферона-гамма

IFN-y - цитокин, имеющий важное клиническое значение. Избыточная или недостаточная функция сигнального пути, запускаемого IFN-y, является причиной различных патологических состояний иммунной системы и организма в целом. В настоящее время для оценки системы интерферонов в клинической практике обычно используют количественные методы определения данного белка, без учета его функциональной активности. Традиционные тесты для определения биологической активности IFN-y технологически сложны, а их результаты плохо поддаются количественному учету. В ходе данной работы была создана модельная система, представляющая собой клеточную линию со стабильно интегрированной в геном репортерной конструкцией под контролем STAT-зависимого промотора. Обработка клеток данной модельной системы IFN-y активирует STAT-1-сигнальный путь, что вызывает экспрессию гена люциферазы FFly. Люциферазная активность количественно измеряется с помощью детектирования биолюминесценции. Были подобраны рабочие значения концентрации (2,5 нг/мл) и время проведения анализа (8 ч). Показана эффективность использования модельной системы для тестирования биоактивности IFN-y.

интерферон-гамма, биоактивность, тест-система, interferon-gamma, bioactivity, test system

1. Bufe A, Gehlhar K, Grage-Griebenow E, Ernst M. Atopic phenotype in children is associated with decreased virus-induced interferon-alpha release. Int Arch Allergy Immunol. 2002;127(1):82-8.

2. Larkin J 3rd, Ahmed CM, Wilson TD, Johnson HM. Regulation of interferon gamma signaling by supperessors of cytokine signaling and regulatory T cells. Fronties in Immunology. 2013;4(469):1-8.

3. Valour F, Perpoint T, Senechal A, Kong XF, Bustamante J, Ferry T, et al. Interferon-γ autoantibodies as predisposing factor for nontuberculous mycobacterial infection. Emerg Infect Dis. 2016;22(6):1124-6.

4. Panel of experts from the Mycobacteria Study Group (GEIM) of the Spanish Society of Infectious Diseases and Clinical Microbiology (SEIMC) and the Spanish Society of Respiratory Diseases and Thoracic Surgery (SEPAR), Santin M, Garcia-Garcia JM, Dominguez J. Guidelines for the use of interferon-y release assays in the diagnosis of tuberculosis infection. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2016; 34(5):303.e1-303.e13.

5. Selimova LM, Kalnina LB, Serebrovskaya LV, Ivanova LA, Gulyaeva AN, Nosik DN. Cytokines during the human immunodeficiency virus infection type 1(HIV-1). Vopr Virusol. 2016;61(1):39-41.

6. Schoenborn JR, Wilson CB. Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses. Adv Immunol. 2007;96:41-101.

7. Darnell JE Jr, Kerr IM, Stark GR. Jak-STAT pathways and transcriptional activation in response to IFNs and other extracellular signaling proteins. Science. 1994;264(5164):1415-21.

8. Общая фармакопейная статья «Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток». М. з. РФ.

9. Михайлова ИН, Барышников АЮ, Морозова ЛФ, Бурова ОС, Демидов ЛВ, Палкина ТН и др. Клеточная линия меланомы человека mel P, используемая для получения противоопухолевых вакцин. Патент на изобретение RUS 2287575, 22.04.2005.

10. Михайлова ИН, Лукашина МИ, Барышников АЮ, Морозова ЛФ, Бурова ОС, Панкина ТН и др. Клеточные линии меланомы - основа для создания противоопухолевых вакцин. Вестник Российской академии медицинских наук. 2005;7:37-40.

11. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.

12. Maniatis T, Fritsch EF, Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 1982.