Использование метода функциональной активности тромбоцитов для диагностики тромбоцитопатий у детей

Применение проточной цитофлуориметрии тромбоцитов с активацией (метод функциональной активности тромбоцитов - ФАТ) позволяет с высокой точностью выявить конкретный рецепторный дефект тромбоцитов, а также определить их функциональное состояние в ответ на различные физиологические стимулы. Целью исследования явились выявление нарушений тромбоцитарного звена гемостаза у детей с геморрагическим синдромом без сопутствующей коагулопатии и анализ связи между выраженностью клинических проявлений и степенью нарушения функции тромбоцитов. В исследование были включены 32 пациента в возрасте от 1 до 17 лет с различными проявлениями геморрагического синдрома, у которых по результатам первичного обследования был исключен диагноз геморрагической коагулопатии или тромбоцитопении. У всех пациентов проводили оценку выраженности геморрагических проявлений (клинический индекс кровоточивости - КИК), а также исследование функциональной активности тромбоцитов. До и после активации исследовали следующие показатели: гликопротеин 1b, интегрин aIIbß3, активная форма интегрина aIIbß3, количество и степень выхода плотных и a-гранул, экстернализацию фосфатидилсерина (ФС) мембраны тромбоцитов. Окрашивание проводили антителами PAC1, CD42b, CD62P, CD61, annexin V, а также измерялась концентрация захвата и выброса мепакрина плотными гранулами. После исследования ФАТ у 2 пациентов не было выявлено никаких нарушений, дефицит интегрина aIIbß3 был выявлен у 4 детей, различные нарушения количества или функции гранул тромбоцитов диагностированы у 26 детей, среди них изолированный дефицит плотных или a-гранул - у 8 и 4 пациентов соответственно. Комбинированные дефекты были выявлены у 14 пациентов. Выявлена прямая зависимость между КИК и степенью активации интегринов и выброса плотных гранул (p < 0,05), статистически значимой связи между КИК и изолированными нарушениями со стороны интегринов, a- или плотных гранул выявить не удалось. Таким образом, степень изменения фенотипических особенностей тромбоцитов может коррелировать с интенсивностью кровоточивости, а исследование ФАТ является привлекательным методом диагностики причин геморрагических нарушений у детей.

дети, кровоточивость, тромбоциты, тромбоцитопатия, функциональная активность тромбоцитов, цитофлуориметрия, children, bleeding, platelets, thrombocytopathy, platelet functional activity, cytoflowmetry

1. Streif W, Knöfler R, Eberl W. Inherited disorders of platelet function in pediatric clinical practice: a diagnostic challenge. KlinPadiatr. 2010;222(3):203-8.

2. Knöfler R, Olivieri M, Weickardt S, Eberl W, Streif W; THROMKID Studiengruppe der Gesellschafter Thrombose- und Hämostaseforschunge.V. First results of the THROMKID study: a quality project for the registration of children and adolescents with hereditary platelet function defects in Germany, Austria and Switzerland. Hamostaseologie. 2007;27(1):48-53.

3. Vo KT, Grooms L, Klima J, Holland-Hall C, O'Brien SH. Menstrual bleeding patterns and prevalence of bleeding disorders in a multidisciplinary adolescent haematology clinic. Haemophilia. 2013;19(1):71-5.

4. Quiroga T, Goycoolea M, Panes O, Aranda E, Martinez C, Belmont S, et al. High prevalence of bleeders of unknown cause among patients with inherited mucocutaneous bleeding. A prospective study of 280 patients and 299 controls. Haematologica. 2007;92(3):357-65.

5. Philipp CS, Dilley A, Miller CH, Evatt B, Baranwal A, Schwartz R, et al. Platelet functional defects in women with unexplained menorrhagia. J Thromb Haemost. 2003;1(3):477-84.

6. Hayward CP, Rao AK, Cattaneo M. Congenital platelet disorders: overview of their mechanisms, diagnostic evaluation and treatment. Haemophilia. 2006;12(Suppl. 3):128-36.

7. Michelson AD. Evaluation of platelet function by flow cytometry. Pathophysiol Haemost Thromb. 2006;35(1-2):67-82.

8. Bowman M, Riddel J, Rand ML, Tosetto A, Silva M, James PD. Evaluation of the diagnostic utility for von Willebrand disease of a pediatric bleeding questionnaire. J Thromb Haemost. 2009;7(8):1418-21.

9. Biss TT, Blanchette VS, Clark DS, Wakefield CD, James PD, Rand ML. Use of a quantitative pediatric bleeding questionnaire to assess mucocutaneous bleeding symptoms in children with a platelet function disorder. J Thromb Haemost. 2010;8(6):1416-9.

10. Marcus PD, NireKG, Grooms L, Klima J, O'Brien SH. The power of a standardized bleeding score in diagnosing paediatric type 1 von Willebrand's disease and platelet function defects. Haemophilia. 2011;17(2):223-7.

11. O’Brien SH. Bleeding scores: are they really useful? Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2012;2012:152-6.

12. Daskalakis M, Colucci G, Keller P, Rochat S, Silzle T, Biasiutti FD, et al. Decreased generation of procoagulant platelets detected by flow cytometric analysis in patients with bleeding diathesis. Cytometry B Clin Cytom. 2014;86(6):397-409.

13. Laffan M; BRIDGE Bleeding and Platelet Disorders Consortium. A whole genome approach to platelet and bleeding disorders. Hamostaseologie. 2016;36(1): 161-166.

14. Nurden AT, Nurden PJ. Inherited disorders of platelet function: selected updates. Thromb Haemost. 2015;13(Suppl. 1):S2-9.

15. Lambert MP. Update on the inherited platelet disorders. Curr Opin Hematol. 2015;22(5):460-6.

16. Leo VC, Morgan NV, Bem D, Jones ML, Lowe GC, Lordkipanidzé M, et al. Use of next-generation sequencing and candidate gene analysis to identify underlying defects in patients with inherited platelet function disorders. J Thromb Haemost. 2015;13(4):643-50.