Наблюдение функционирования гранулоцитов при тромбообразовании ex vivo у пациентов с ANKRD26- ассоциированной тромбоцитопенией

ANKRD26-ассоциированная тромбоцитопения – это несиндромальная наследственная тромбоцитопения, для которой не существует формальных диагностических критериев по функциональным тестам. Известно, что при патогенетических вариантах в гене ANKRD26 значительно возрастает вероятность миелоидных лейкозов, однако исследований функционирования гранулоцитов при этой патологии не проводили. Цель данного исследования – анализ функционирования гранулоцитов и тромбоцитов при тромбообразовании ex vivo у пациентов с ANKRD26-ассоциированной тромбоцитопенией. В исследование были включены два пациента и 10 здоровых добровольцев. Данное исследование поддержано Независимым этическим комитетом и утверждено решением Ученого совета НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева. Внутриклеточная сигнализация и функциональные ответы тромбоцитов наблюдались методом непрерывной проточной цитометрии; тромбообразование ex vivo и функционирование гранулоцитов – на флуоресцентном микроскопе в плоско-параллельных проточных камерах, содержащих фибриллярный коллаген. При физиологической (АДФ, аналог коллагена) активации тромбоцитов пациентов in vitro не отмечено значимых их отличий от тромбоцитов здоровых доноров. При этом наблюдаемый ex vivo размер тромбов был значительно снижен по сравнению со здоровыми донорами и литературными данными о пациентах с другими тромбоцитопениями. Наблюдаемое количество и активность (скорость перемещения) гранулоцитов пациентов были в пределах нормальных значений. Однако гранулоциты пациентов имели значительные морфологические отличия по сравнению с гранулоцитами здоровых доноров, а именно повышенную распластанность (в частности, большое количество тонких псевдоподий), а также повышенную кривизну траекторий движения. При ex vivo наблюдении тромбообразования у пациентов с ANKRD26- ассоциированной тромбоцитопенией наблюдается значительно уменьшенный размер тромбов при нормальной активности тромбоцитов и повышенной изменчивости формы гранулоцитов.

гранулоциты, нейтрофилы, тромбоциты, ANKRD26, флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия

1. Perez Botero J.P., Dugan S.N., Anderson M.W. ANKRD26-Related Thrombocytopenia, in: E. Adam MP, Ardinger HH, Pagon RA, et al. (Ed.), GeneReviews, Seattle (WA): University of Washington, Seattle, 2018: p. 2018 Jun 21. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK507664/

2. Averina M., Jensvoll H., Strand H., Sovershaev M. A novel ANKRD26 gene variant causing inherited thrombocytopenia in a family of Finnish origin: Another brick in the wall? Thromb Res 2017; 151: 41–3. DOI: 10.1016/j.thromres.2017.01.001

3. Ердомаева Я.А., Федорова Д.В., Жарков П.А., Курникова М.А., Манн С.Г., Райкина Е.В. ANKRD26-связанная тромбоцитопения как частный случай наследственной тромбоцитопении с предрасположенностью к гематологическим злокачественным новообразованиям. Вопросы гематологии/ онкологии и иммунопатологии в педиатрии 2019; 1854–61. DOI: 10.24287/1726-1708-2019-18-3- 54-61

4. Noris P., Favier R., Alessi M.C., Geddis A.E., Kunishima S., Heller P.G., et al. ANKRD26-related thrombocytopenia and myeloid malignancies. Blood 2013; 122: 1987–9. DOI: 10.1182/blood-2013-04-499319

5. Balduini A., Raslova H., Di Buduo C.A., Donada A., Ballmaier M., Germeshausen M., Balduini C.L. Clinic, pathogenic mechanisms and drug testing of two inherited thrombocytopenias, ANKRD26-related Thrombocytopenia and MYH9-related diseases. Eur J Med Genet 2018; 61: 715–22. DOI: 10.1016/j.ejmg.2018.01.014

6. Perez Botero J., Ho T.P., Hogan W.J., Kenderian S., Gangat N., Tefferi A., et al. Clinical spectrum and clonal evolution in germline syndromes with predisposition to myeloid neoplasms. Br J Haematol 2018; 182: 141–5. DOI: 10.1111/bjh.14746

7. Necchi V., Sommi P., Vanoli A., Manca R., Ricci V., Solcia E. Proteasome particle-rich structures are widely present in human epithelial neoplasms: correlative light, confocal and electron microscopy study. PLoS One 2011; 6: e21317. DOI: 10.1371/journal.pone.0021317

8. Noris P., Perrotta S., Seri M., Pecci A., Gnan C., Loffredo G., et al. Mutations in ANKRD26 are responsible for a frequent form of inherited thrombocytopenia: Analysis of 78 patients from 21 families. Blood 2011; 117: 6673–80. DOI: 10.1182/blood-2011-02-336537

9. Necchi V., Balduini A., Noris P., Barozzi S., Sommi P., di Buduo C., et al. Ubiquitin/proteasome-rich particulate cytoplasmic structures (PaCSs) in the platelets and megakaryocytes of ANKRD26-related thrombocytopenia. Thromb Haemost 2013; 109: 263–71. DOI: 10.1160/TH12-07-0497

10. Rayes J., Watson S.P., Bourne J.H., Brill A. The dual role of platelet – innate immune cell interactions in thromboinflammation, 2019; 1–13. DOI: 10.1002/rth2.12266

11. Мартьянов А.А., Морозова Д.С., Хорева А.Л., Пантелеев М.А., Щербина А.Ю., Свешникова А.Н. Особенности внутриклеточной кальциевой сигнализации тромбоцитов при синдроме Вискотта– Олдрича. Вопросы онкологии/гематологии и иммунопатологии в педиатрии 2020; 1.

12. Morozova D.S., Martyanov A.A., Korobkina J.-J.D., Sokolov A.V., Shamova E.V., Gorudko I.V., Obydennyi S.I., Sveshnikova A.N. Granulocytes role in thrombus formation under low shear rate flow conditions as procoagulant platelet scavengers. In submission, 2020.

13. Raciti G.A., Bera T.K., Gavrilova O., Pastan I. Partial inactivation of Ankrd26 causes diabetes with enhanced insulin responsiveness of adipose tissue in mice. Diabetologia 2011; 54: 2911–22. DOI: 10.1007/s00125-011-2263-9

14. Bluteau D., Balduini A., Balayn N., Currao M., Nurden P., Deswarte C., et al. Thrombocytopenia-associated mutations in the ANKRD26 regulatory region induce MAPK hyperactivation. J Clin Invest 2014; 124: 580–91. DOI: 10.1172/JCI71861

15. Aomatsu K., Kato T., Fujita H., Hato F., Oshitani N., Kamata N., et al. Toll-like receptor agonists stimulate human neutrophil migration via activation of mitogen-activated protein kinases. Immunology 2008; 123: 171–80. DOI: 10.1111/j.1365-2567.2007.02684.x