Первые результаты проведения генетического скрининга и изучения генотип-фенотипических корреляций у пациентов с ретинобластомой из Беларуси
Аннотация
Ретинобластома – это агрессивное онкологическое заболевание глаза, происходящее из клеток-предшественников фоторецепторов сетчатки, наиболее часто дебютирующее в детском возрасте. У 98% пациентов ретинобластома инициируется биаллельной инактивацией гена RB1, играющего важную роль в регуляции клеточного цикла и поддержании стабильности генома. Около 40% нарушений в гене RB1 являются герминальными. Цель исследования – анализ частоты герминальных нарушений гена RB1 и их связи с клиническим фенотипом в группе белорусских пациентов с ретинобластомой. В исследование включено 20 пациентов из неродственных семей (9 пациентов с монолатеральной ретинобластомой, 11 – с билатеральной). У 2 из 11 пациентов с билатеральной ретинобластомой отмечен семейный анамнез заболевания. Геномную ДНК выделяли из суспензии лейкоцитов периферической крови. С полученной ДНК ставили серию ПЦР для амплификации фрагментов, включающих последовательности всех экзонов, регионы сплайс-сайтов и промотерные области. Детектирование нуклеотидных последовательностей полученных ампликонов выполняли методом высокопроизводительного секвенирования (NGS). Наличие клинически значимых нарушений подтверждали методом автоматического секвенирования по Сенгеру. Крупные поломки определяли методом мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции (MLPA) или флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). При выявлении нарушения у пробанда, выполняли генетическое исследование его кровным родственникам (5 семей). У 14 пациентов выявлено 13 различных генетических нарушения, 4 из которых ранее не были идентифицированы у пациентов с ретинобластомой среди других популяций (3 exon: c.350_351delTT, p.Phe117TyrfsTer2; 8 exon: c.861+2T>G; 24 exon: c.2520+4A>G; Del 16-17 exons). Все нарушения детектированы в гетерозиготном состоянии. Среди 13 уникальных нарушений: 38,5% (n=5) дефектов в сплайс-сайтах; 15,4% (n=2) миссенс; 15,4% (n=2) небольших делеций, приводящих к сдвигу рамки считывания; 23% (n=3) крупных делеций; 7,7% (n=1) нонсенс. Герминальные нарушения определены у 33,3% (3/9) пациентов с монолатеральной ретинобластомой и у 100% (11/11) с билатеральной. У 10% пациентов определён наследственный характер ретинобластомы. При исследовании 5 семей, у трёх пробандов выявленные нарушения определены как de novo. В этой статье представлены первые данные, полученные при генетическом исследовании белорусских пациентов с ретинобластомой. 78,6% нарушений детектированы методом секвенирования, тогда как 21,4% - методами MLPA и FISH, что демонстрирует необходимость применения комплексного подхода. Среди спорадических нарушений в 66,6% случаев (12/18) была затронута герминальная линия, что подчеркивает важность использования генетического тестирования при диагностике и клиническом мониторинге пациентов с ретинобластомой.
Об авторах
Ирина Евгеньевна ГурьяноваБеларусь
Александр Владимирович Любушкин
Оксана Олеговна Макаревич
Дарья Юрьевна Литвинова
Владислав Русланович Вертёлко
Елена Викторовна Волочник
Екатерина Александровна Полякова
Александр Александрович Мигас
Наталья Евгеньевна Конопля
Дополнительные файлы
Рецензия
Для цитирования:
Гурьянова И.Е., Любушкин А.В., Макаревич О.О., Литвинова Д.Ю., Вертёлко В.Р., Волочник Е.В., Полякова Е.А., Мигас А.А., Конопля Н.Е. Первые результаты проведения генетического скрининга и изучения генотип-фенотипических корреляций у пациентов с ретинобластомой из Беларуси. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2022;21(2).